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  • 胰蛋白酶
    胰蛋白酶

    用胰酶经分离、纯化精制而成的类白色粉末。

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    北京鸿润宝顺科技有限公司
    3
    地区:北京

    匹配产品:酪蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母浸粉、蛋白胨、多价胨、胰蛋白胨、酸水解酪蛋白胨、牛肉浸粉、酵母膏等培养基原材料和各种培养基为主的专业生产经营厂家。同时,公司还在上述产品的基础上,研制、经营胃蛋白酶、胰酶、木瓜酶、中性酶、酸性酶、碱性酶、果胶酶、纤维素酶等一系列酶制剂,产品畅销国内外市场。

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  • 胰蛋白酶
    胰蛋白酶

    胰蛋白酶是一种蛋白水解酶,它能特异性地水解带赖氨酸和精氨酸的带正电荷的侧链。

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    宁波林叶生物科技有限公司
    12
    地区:上海

    匹配产品:胰蛋白酶、糜蛋白酶、透明质酸酶、脱氧核糖核酸酶I、核糖核酸酶A、细胞色素C、糜蛋白酶原、胰激肽原酶、抑肽酶、辣根过氧化物酶、弹性蛋白酶

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  • 胰岛素生产用酶厂家
    胰岛素生产用酶厂家

    重组胰蛋白酶 Cat.No.:RPT0201 CAS: 9002-07-7 EC: 3.4.21.4 来源:重组猪胰蛋白酶,基因工程生产,大肠杆菌表达   1.产品简介 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,可于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中。如:蛋白质酶解生产多肽;各种组织的细胞分离;蛋白质的酶解、测序;重组胰岛素生产等等。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产,氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。酶切特异性相同。分子量为24kD,最适pH为7-10?;钚允芩堪彼岬鞍酌敢种萍寥鏟MSF等的抑制,金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。   2.产品优势 无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,如猪流感病毒、猪细小病毒等。 纯度高:无其它杂酶污染;酶切反应无其它副反应。 稳定:冻干粉,易于储存和运输;批量生产,产品质量稳定。   3.产品特性 来源 重组大肠杆菌 纯化 HPLC 产品性状 白色冻干粉 比活 ≥3800 USP u/mg pro 纯度 (RP-HPLC) ≥70% β-胰蛋白酶, ≤ 20% α-胰蛋白酶 其他酶含量 无糜蛋白酶、羧肽酶A等污染 活力单位:25℃,pH7.6,反应体系3.2ml (1cm 光路),每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。   4.产品用途 重组猪胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质,可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中,如:重组胰岛素生产;细胞培养、细胞发酵;蛋白质的酶解、测序;各种组织的细胞分离等。   5.推荐使用方法 使用1mMHCl溶解,重组胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时,酶量:目的蛋白=1:50-1:1000,最适PH为7-9.   重组羧肽酶B Cat.No.:RCPB01 CAS: 9025-24-5 EC: 3.4.17.2 来源:基因工程生产,大肠杆菌表达   1.产品简介 羧肽酶B专一水解蛋白质C-末端碱性氨基酸(赖氨酸、精氨酸、组氨酸);又称为肽酰-L-赖氨酸(L-精氨酸)水解酶;精蛋白酶。分子量为35kD,等电点为6.0,最适pH为7-9?;钚允芫彼?、赖氨酸的竞争性抑制,金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。   2.产品优势 无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,如猪流感病毒、猪细小病毒等。 纯度高:无糜蛋白酶、羧肽酶A等活性,胰蛋白酶含量小于10ppm,酶切反应无其它副反应。 稳定:冻干粉,易于储存和运输。     来源 重组大肠杆菌 纯化 HPLC 产品性状 白色或类白色或者淡黄色冻干粉 成分 Tris,NaCl和糖类 蛋白含量 35%-60% 电泳鉴定(12%SDS-PAGE) 单一主条带 分子量 35kD 比活 ≥170 u/mg pro 其他酶含量 无糜蛋白酶、羧肽酶A等,胰蛋白酶含量小于10ppm 酶活定义:25℃,pH7.65,1min催化1μmol 马尿酰-L-精氨酸水解的酶量为一个酶活单位。   5.推荐使用方法 用无菌水或者25mM Tris-HCl (pH 7.65)溶解羧肽酶B,使酶液浓度为1-10mg/ml;(质量比)酶量:目的蛋白=1:50-1:1000,最适PH为7-9.   6.储存和稳定性 重组羧肽酶B冻干粉存于2℃-8℃,24个月稳定;溶解以后存于-20℃,24个月稳定,反复冻融10次酶活保持在90%以上。            

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    上海雅心生物技术有限公司
    7
    地区:上海

    湖北11选5官网 www.ytatv.cn 匹配产品:酶制剂,医药中间体,精细化学品,生化试剂,原料药;

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  • 重组胰蛋白酶 /Trypsin
    重组胰蛋白酶 /Trypsin

    重组胰蛋白酶 Cat.No.:RPT0201 CAS: 9002-07-7 EC: 3.4.21.4 来源:重组猪胰蛋白酶,基因工程生产,大肠杆菌表达 1.产品简介 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,可于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产,氨基酸序列与猪胰蛋白酶一致。重组胰蛋白酶的性质与动物源胰蛋白酶相同。分子量为24kD,最适pH为7.0- 9.0?;钚允芩堪彼岬鞍酌敢种萍寥鏟MSF等的抑制,金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。 通常所用的胰蛋白酶为从猪胰腺提取纯化得到。在生物制药过程中,为了确保生物制品的用药安全,动物来源的原材料正在受到越来越严格的规定,比如在胰岛素和疫苗的生产中。雅心生物生产的重组胰蛋白酶保证了在整个生产过程如发酵、纯化和终产品中无动物源原料使用。生产过程严格遵守NSF ISO9001 2008的规定,按照GMP操作规范生产,确保了产品质量和批次稳定性。 2.产品优势 无动物源性:重组生产,生产过程不使用任何动物源性的原料。 纯度高:生产过程采用自激活方法,无其它任何杂酶污染。 稳定:冻干粉,易于储存和运输;批量生产,产品质量稳定。 3.产品特性 来源 重组大肠杆菌 纯化 HPLC 产品性状 白色冻干粉 比活 ≥3800 USP u/mg pro 纯度 (RP-HPLC) ≥70% β-胰蛋白酶, ≤ 20% α-胰蛋白酶 活力单位:25℃,pH7.6,反应体系3.2ml (1cm 光路),每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 4.产品用途 重组猪胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质,可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中,如:重组胰岛素生产;细胞培养、细胞发酵;蛋白质的酶解、测序;各种组织的细胞分离等。 5.推荐使用方法 使用1mMHCl或50mM HAc溶解,重组胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时,酶量:目的蛋白=1:50-1:1000,最适PH为7.0-9.0. 6.相关产品: 重组人胰蛋白酶;重组胰蛋白酶细胞消化液;序列分析纯重组胰蛋白酶;序列分析纯重组胰蛋白酶;重组羧肽酶B;  

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  • 重组人胰蛋白酶
    重组人胰蛋白酶

    重组人胰蛋白酶 Cat.No.: RHT03 CAS: 9002-07-7 EC: 3.4.21.4 储存温度:2-8℃ 来源:重组人胰蛋白酶,基因工程生产,大肠杆菌表达。 蛋白序列:氨基酸序列与人胰蛋白酶完全一致。   1.产品简介 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,可切割赖氨酸及精氨酸C末端形成的肽键。雅心重组人胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产,氨基酸序列与人胰蛋白酶完全一致。重组人胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质,可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中?;钚允芩堪彼岬鞍酌敢种萍寥鏟MSF,抑肽酶等抑制,金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。   2.产品特性 来源 重组大肠杆菌 外观 白色、类白色粉末 活性 ≥2500 USP units/mg pro. 冻干粉中的蛋白含量 ≥ 90% 纯度(HPLC) ≥ 95% 活力单位:25℃,pH7.6,反应体系3.2ml (1cm 光路),每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。   3.推荐使用方法 使用1mMHCl溶解,重组人胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时,酶量:目的蛋白=1:50-1:1000,最适pH为7.0-11.0。   4.储存和运输稳定性 储存稳定性:重组人胰蛋白酶冻干粉存于2-8℃,24个月稳定;使用1mMHCl溶解后储存于 -20℃,反复冻融10次,无活性损失。 运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。   5.产品优势 无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料。 质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产品批次间无差异,质量稳定。 纯度高:比活高;宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。 冻干粉:易于储存和运输。 符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2008质量体系并符合GMP指导原则。 质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。   6.产品用途 胰蛋白酶是一种内肽酶,可用于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键,从而将大分子蛋白裂解为小肽。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中,如:细胞培养各种组织的细胞分离;变性蛋白质的降解;蛋白质的酶解、测序;干细胞治疗;肿瘤的细胞治疗等。   7.相关产品: 重组羧肽酶B; 重组抑肽酶; 重组肠激酶; 测序级重组胰蛋白酶。

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    匹配产品:酶制剂,医药中间体,精细化学品,生化试剂,原料药;

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  • 重组胰蛋白酶细胞消化液;Trypsin solution
    重组胰蛋白酶细胞消化液;Trypsin solution

    重组胰蛋白酶细胞消化液 1.组成: 重组胰蛋白酶冻干粉,无Ca2+ ,Mg2+ ,无EDTA的平衡液,pH7.2~7.4,无菌过滤。   2.产品优势: 无动物源性:重组生产,保证了无动物源性病毒污染。使用安全。 即配即用:冻干剂型,即配即用,固体包装,降低了污染风险。 高纯度:基因工程重组生产,HPLC纯化,不含杂酶、杂蛋白及脂类、DNA等。 细胞消化能力强:室温消化,高纯度,避免了杂质对细胞生长的影响。 无EDTA:在缓冲液中不含有EDTA,但是保持高的细胞消化能力,排除了细胞流式实验中EDTA的影响。   3.使用说明: 配制方法 1. 取1ml冷的平衡液加到含有胰蛋白酶冻干粉的EP管中; 2. 胰蛋白酶充分溶解; 3. 全部移入装有平衡液的瓶中,4h内使用;   注意事项 1. 如一次使用不完,配制后按照每次使用量 立即分装,-20℃保存; 2. 使用时,-20℃取出,室温溶解后使用,不需要37℃预热。 3. 按照以上方法的配置后,.酶的浓度为2000BAEE/ml,如必要,可根据消化效果进行稀释。   4.产品信息: 产品名称 产品编号 活性 包装 产地 重组胰蛋白酶 细胞消化液 RTS04 2000 BAEE u/ml 100ml,500ml  上海雅心 酶活单位:25℃,pH7.6,反应体系3.0ml (1cm 光路),每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.001定义为一个BAEE单位。 酶活单位换算:BAEE unit, USP unit活性单位之间的活性换算:              1USP unit =3 BAEE Unit   5.相关产品: 重组人源胰蛋白酶冻干粉(≥2500 USP U/mg pro); 重组猪源胰蛋白酶冻干粉(≥3800 USP U/mg pro)    

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  • 重组胰岛素生产用酶
    重组胰岛素生产用酶

    重组羧肽酶B Cat.No.:RCPB01 CAS: 9025-24-5 EC: 3.4.17.2 来源:基因工程生产,大肠杆菌表达   1.产品简介 羧肽酶B专一水解蛋白质C-末端碱性氨基酸(赖氨酸、精氨酸、组氨酸);又称为肽酰-L-赖氨酸(L-精氨酸)水解酶;精蛋白酶。分子量为35kD,等电点为6.0,最适pH为7-9?;钚允芫彼?、赖氨酸的竞争性抑制,金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。   2.产品优势 无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,如猪流感病毒、猪细小病毒等。 纯度高:无糜蛋白酶、羧肽酶A等活性,胰蛋白酶含量小于10ppm,酶切反应无其它副反应。 稳定:冻干粉,易于储存和运输。   来源 重组大肠杆菌 纯化 HPLC 产品性状 白色或类白色或者淡黄色冻干粉 成分 Tris,NaCl和糖类 蛋白含量 35%-60% 电泳鉴定(12%SDS-PAGE) 单一主条带 分子量 35kD 比活 ≥170 u/mg pro 其他酶含量 无糜蛋白酶、羧肽酶A等,胰蛋白酶含量小于10ppm 酶活定义:25℃,pH7.65,1min催化1μmol 马尿酰-L-精氨酸水解的酶量为一个酶活单位。   4.产品用途 重组胰岛素及其类似物的生产;蛋白质C-末端氨基酸的测定;其它重组多肽类物质的生产;某些特殊化合物的酶促合成。   5.推荐使用方法 用无菌水或者25mM Tris-HCl (pH 7.65)溶解羧肽酶B,使酶液浓度为1-10mg/ml;(质量比)酶量:目的蛋白=1:50-1:1000,最适PH为7-9.   6.储存和稳定性 重组羧肽酶B冻干粉存于2℃-8℃,24个月稳定;溶解以后存于-20℃,24个月稳定,反复冻融10次酶活保持在90%以上。            

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  • 重组胰蛋白酶trypsin,Cas:9002-07-7 EC3.4.21.4
    重组胰蛋白酶trypsin,Cas:9002-07-7 EC3.4.21.4

    重组胰蛋白酶 Cat.No.:RPT0201 CAS: 9002-07-7 EC: 3.4.21.4 来源:重组猪胰蛋白酶,基因工程生产,大肠杆菌表达 1.产品简介 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,可于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产,氨基酸序列与猪胰蛋白酶一致。重组胰蛋白酶的性质与动物源胰蛋白酶相同。分子量为24kD,最适pH为7.0- 9.0?;钚允芩堪彼岬鞍酌敢种萍寥鏟MSF等的抑制,金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。 通常所用的胰蛋白酶为从猪胰腺提取纯化得到。在生物制药过程中,为了确保生物制品的用药安全,动物来源的原材料正在受到越来越严格的规定,比如在胰岛素和疫苗的生产中。雅心生物生产的重组胰蛋白酶保证了在整个生产过程如发酵、纯化和终产品中无动物源原料使用。生产过程严格遵守NSF ISO9001 2008的规定,按照GMP操作规范生产,确保了产品质量和批次稳定性。 2.产品优势 无动物源性:重组生产,生产过程不使用任何动物源性的原料。 纯度高:生产过程采用自激活方法,无其它任何杂酶污染。 稳定:冻干粉,易于储存和运输;批量生产,产品质量稳定。 3.产品特性 来源 重组大肠杆菌 纯化 HPLC 产品性状 白色冻干粉 比活 ≥3800 USP u/mg pro 纯度 (RP-HPLC) ≥70% β-胰蛋白酶, ≤ 20% α-胰蛋白酶 活力单位:25℃,pH7.6,反应体系3.2ml (1cm 光路),每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 4.产品用途 重组猪胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质,可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中,如:重组胰岛素生产;细胞培养、细胞发酵;蛋白质的酶解、测序;各种组织的细胞分离等。 5.推荐使用方法 使用1mMHCl或50mM HAc溶解,重组胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时,酶量:目的蛋白=1:50-1:1000,最适PH为7.0-9.0. 6.相关产品: 重组人胰蛋白酶;重组胰蛋白酶细胞消化液;序列分析纯重组胰蛋白酶;序列分析纯重组胰蛋白酶;重组羧肽酶B;

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  • 序列分析胰蛋白酶
    序列分析胰蛋白酶

    序列分析纯胰蛋白酶 Cat.No.:SRT0201 CAS: 9002-07-7 EC: 3.4.21.4 储存温度:2-8℃ 别名:重组修饰胰蛋白酶;重组甲基化修饰胰蛋白酶;重组甲基化修饰突变胰蛋白酶 来源:重组胰蛋白酶,基因工程生产,大肠杆菌表达 蛋白序列:氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。   1.产品简介 雅心重组胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产,氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致,无糜蛋白酶等杂酶污染,不含有且不需要TPCK抑制其他酶活性,活性高,酶切特异性高。胰蛋白酶容易自切产生自身自切片段影响质谱分析结果,甲基化修饰和突变保证其不自切,从而也去除了因自切而产生的假糜蛋白酶的活性。   2.产品特性 来源 重组大肠杆菌 外观 白色、类白色粉末 比活(单位/mg 蛋白) ≥ 4500 USP units/mg pro. 蛋白电泳 单一主条带 电泳(分子量) 24.0±2.4 kDa 纯度(HPLC) ≥95%   3.推荐使用方法 建议使用50mMHAc或1mM HCl溶解或稀释。 使用时,稀释在50mM NH4HCO3 或者ph7.0-8.0的缓冲溶液中。 在酶切缓冲液中建议使用1mM CaCl2,重组胰蛋白酶:目的蛋白=1:20-1:100,最适PH为7.0-8.0。   4.储存和运输稳定性 储存稳定性:重组胰蛋白酶冻干粉存于2-8℃,24个月稳定;使用50mMHAc或1mM HCl             溶解后储存于-20℃,反复冻融5次,无活性损失。 运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。   5.产品优势 ① 序列分析纯蛋白酶:特异性高,稳定性好。 ② 无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原       料。 ③ 质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产 品批次间无差异,质量     稳定。 ④ 纯度高:比活高;宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。 ⑤ 冻干粉:易于储存和运输。 ⑥ 符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF     ISO 9001:2008质量体系并符合GMP指导原则。 ⑦ 质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。   6.产品用途 重组胰蛋白酶具有与动物源性胰蛋白酶相同的酶学性质。 可替代胰蛋白酶使用,且有很多优势,如无杂酶活性,高稳定性,不自切,高活性; 在使用中,无非特异性酶切片段及自切片段出现。 用于特异性的蛋白质酶解、蛋白测序、制作肽谱图、蛋白质组学研究、Z-D胶上的肽段的胰酶消化等。   7.相关产品 重组羧肽酶B; 重组胰蛋白酶; 重组肠激酶; 重组抑肽酶。

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    地区:上海

    匹配产品:酶制剂,医药中间体,精细化学品,生化试剂,原料药;

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  • 重组胰蛋白酶酶联免疫吸附测定试剂盒
    重组胰蛋白酶酶联免疫吸附测定试剂盒

    重组胰蛋白酶酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书 (96T) 使用前请仔细阅读说明书。若有任何问题,请联系我们。              试剂盒用途 本试剂盒用于体外定量检测大肠菌液体中重组胰蛋白酶含量。本试剂盒仅供研究和工业生产使用。   试剂盒基本参数 灵敏度 < 1 ng/ml 检测范围:0.078 - 40 ng/ml 特异性:可检测重组胰蛋白酶,与其它重组大肠菌表达系统相关蛋白无明显交叉反应。 重复性:板内,板间变异系数均 < 10%。 工作时间:熟练实验人员可在2.5小时内完成一次测定。 有效期:6个月   试剂盒组成及保存 未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周。如果一周以后才使用试剂盒,请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。 中文名称 规格 保存条件 抗体包被的ELISA酶标板(96孔可拆卸) (MicroELISA Plate(Dismountable) 8孔×12条 -20℃ 冻干标准品(40ng/支)(A1) (Reference Standard) 4支 2-8℃ 浓缩辣根过氧化物酶化抗体 (A2)(Concentrated HRP-Detection Ab) 1支×0.05mL -20℃ 标准品 & 样品稀释液 (P1) (Reference Standard & Sample Diluent) 1瓶×20 mL 2-8℃ HRP-抗体稀释液 (P2) (HRP- Ab Diluent) 1瓶×15 mL 2-8℃ 浓缩洗涤液-1(25 X)(P3) (Concentrated Wash Buffer (25x)) 2瓶×20 mL 2-8℃ 浓缩洗涤液-2(25 X)(P4) (Concentrated Wash Buffer (25x) 2瓶×10 mL 2-8℃ 显色底物(TMB)(A3) (Substrate Reagent) 5支×0.125 mL -20℃ 避光 底物稀释液(TMB)(P5) (Substrate Reagent) 1瓶×15 mL 2-8℃ 避光 反应终止液 (P6) (Stop Solution) 1瓶×10 mL 2-8℃ 封板覆膜(可重复使用) (Plate Sealer) 5张   产品说明书 (User Manual) 1份   质检报告 (Certificate of Analysis) 1份     说明: 1、所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。 2、酶标板-20℃可存放6个月,2-8℃存放勿超过一周。   试验所需自备物品 1.酶标仪(滤光片波长450 nm和650nm) 2.高精度移液器,EP管及一次性吸头 3. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水 4.洁净吸水纸   待测样品注意事项 1.样品收集后若在1周内进行检测的可保存于2-8℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或 -80℃(3个月内检测),避免反复冻融。 2.试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围,如果样品中检测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释后再测。 3.若使用化学裂解液制备的样本或细胞提取液,由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。   检测前准备工作 1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。提前15分钟打开酶标仪预热。 2.洗涤液配制 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。  提示:从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液温度应为室温)。请当日使用。 3.标准品配制 将标准品于1000转/分离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0 mL至冻干标准品中,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度为10 ng/mL), 然后进行倍比稀释(注:不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度:  10、 5、 2.5、 1.25、 0.63、0.312、0.156、0 ng/mL。样品稀释液直接作为空白孔0 ng/mL。   倍比稀释方法 取7只EP管,每管中加入500 μL标准品&样品稀释液,从10 ng/mL的标准品工作液中吸取500 μL加入含有500 μL样品稀释液的EP管中混匀配成5 ng/mL的标准品工作液,按此步骤往后依次吸取混匀。如下图。   标准品稀释图例(以500 μL为例)   提示:最后一管直接作为空白孔。   4.HRP标记抗体工作液配制 实验前请先将抗体管低速离心,以避免管壁及管盖上残留抗体。计算实验所需用量(以100 μL /孔计算),实际配制时应多配制100-200 μL。使用前15分钟,用抗体稀释液将HRP-标记抗体稀释为工作浓度(抗体:稀释液 = 1:250),当日使用。   5.TMB显色工作液配制 实验前计算实验所需用量(以100 μL /孔计算),实际配制时应多配制100-200 μL。使用前15分钟,用底物稀释液将TMB显色底物稀释为工作浓度(底物:稀释液 =1:20),当日使用。   洗涤方法 自动洗板机:每孔加入洗涤液350 μL, 注入和吸出间隔60秒。 手工洗板: 甩尽孔内液体,在洁净厚吸水纸上拍干,每孔加入洗涤液350 μL,浸泡2-3分钟,吸去(不可触及板壁)或甩掉板内液体,在洁净厚吸水纸上拍干。   操作步骤 1.将标准品工作液依次加入到前两列孔中,每个浓度的工作液并列加两孔,每孔100 μL。待测样加入到其他孔,每孔100 μL,若样本浓度高于检测范围,需用标准品&样本稀释液稀释后加样。将酶标板覆膜并置于37℃孵育60分钟。 提示:加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,避免产生气泡。加样时间控制在10分钟内。 2.洗涤:弃去液体,甩干,在洁净厚吸水纸上拍干。每孔加入 洗涤液-1 350 μL,浸泡2-3分钟,吸去(不可触及板壁)或甩掉板内液体,在洁净的厚吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。 3.每孔中加入HRP-抗体工作液100 μL,混匀,酶标板覆膜并置于37℃孵育30分钟。     4.洗涤:用 洗涤液1 洗板3次,方法步骤同2。 5.洗涤:用 洗涤液2 洗板2次,方法步骤同2。, 6.每孔加底物显色工作液(TMB)100 μL,酶标板覆膜并置于37℃ 孵育10分钟。 提示: 根据实际显色情况酌情缩短或延长,显色时间在5-30分钟范围内。当标准孔出现明显梯度时,即可终止。 7.每孔加终止液50 μL,终止反应,室温放置1分钟。 提示: 终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。加液时移液枪枪头切不要接触孔内溶液以避免污染,影响实验结果。 8.用酶标仪在450 nm波长(参考波长650nm)测量各孔的光密度(OD450/650 nm值)。  提示: 请提前打开酶标仪电源,预热仪器,设置检测程序。   结果判断 1.计算每组复孔的平均OD值。每个标准品的平均OD值减去空白孔的OD值作为矫正值。以标准品的浓度为横坐标(X),OD值为纵坐标(Y),绘出标准曲线(作图时亦可去掉空白组的值)。 2.推荐使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.3或ELISA Calc(请使用Logistic五参数拟合曲线计算方法绘制标准曲线)等。 3.若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测。 4.典型数据 由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。    X-浓度(ng/mL) 10 5 2.5 1.25 0.625 0.312 0.156 0 Y-OD450/650 nm 1.601 1.454 1.231 0.872 0.624 0.382 0.244 0.057 Y-OD450/650 nm(去本底) 1.574 1.397 1.174 0.815 0.567 0.325 0.187 0 回收量(ng/mL) 10.167 4.822 2.628 1.182 0.657 0.306 0.153 — 回收率% 101.7 96.4 105.1 94.6 105.1 98.1 98.1 —          注意事项 储存:试剂盒中各种试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶需旋紧以防止蒸发和微生物污染,否则可能会出现错误的结果。 酶标板:刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。暂时不用板条应拆下后放入备用自封袋,按推荐温度存放。 加样:加样和加同一试剂时,第一孔与最后孔之间加样时间间隔过大将导致不同的“预温育”时间,从而明显的影响到测量值的准确性及重复性,每次的加样时间最好控制在10分钟之内,推荐设置复孔。 温育:为防止样品蒸发,实验时必须给酶标板覆膜,洗板后应尽快进行下步操作,避免酶标板处于干燥状态。严格遵守给定的温育时间和温度。 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸或干布上拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要清除酶标板底部残留的液体和手指印,以免影响酶标仪读数。 试剂配制:试剂盒在运输过程中会使液体沾到管壁或瓶盖,因此使用1000转/分离心一分钟,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。所有试剂请按说明书指示请精确配制。 显色时间的控制:加入底物后,请定时观察反应孔的颜色变化(比如每隔五分钟),如梯度已经很明显,请提前加终止液终止反应,以避免颜色过深,影响酶标仪读数。 底物:请避光保存底物。在储存和温育时,避免强光直接照射。 混匀:充分轻微混匀对反应结果尤为重要,最好使用微量振荡器,使用最低频率,如无微量振荡器,可以在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 不同批号的试剂盒组分不能混用(洗涤液和终止液除外)。   问题分析 若实验结果有问题,请及时对显色结果拍照,并妥善保存未使用板条及试剂,然后联系技术支持。也可参考以下信息以找出原因。 问题描述 可能原因 相应对策   标准曲线梯度差 吸液或加液不准 检查移液器和吸头 标准品稀释不正确 溶解标准品时稍微旋转瓶身,轻轻混匀使粉末完全溶解 洗涤不完全 保证洗涤时间和洗涤次数及每孔的加液量 显色很弱或无色 温育时间太短 保证充足的温育时间 实验温度不正确 使用推荐的实验温度 试剂体积不够或漏加 检查吸液及加液过程,保证所有试剂按顺序足量添加 稀释不正确   读数数值低   酶标仪设置不正确 在酶标仪上检查波长和滤光片装置 提前打开酶标仪预热 变异系数大 加液不正确 检查加液情况       背景值高   检测抗体的工作浓度过高 使用推荐的稀释倍数   酶标板洗涤不完全 重新仔细阅读操作步骤,保证每步清洗完全;如果用自动洗板机,请检查所有的出口是否有堵塞;是否使用试剂盒配备的洗涤液。 洗液有污染 配制新鲜的洗液   灵敏度低 ELZSA试剂盒保存不当 按说明书要求保存相关试剂 读数前未终止 OD读数前应在每孔中加入终止液

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